单域抗体ELISA试剂盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型成为有色的氧化型，ELISA检查试剂盒出现色彩反响。因而，可通过底物的色彩反响来断定有无相应的免疫反响，色彩反响的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。
ELISA试剂盒测定方法中有三个必要的试剂：
（1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸剂"（immunosorbent）；
（2）酶符号的抗原或抗体，称为“酶联物"、“联络物"（conjugate）；
（3）酶反响的底物。依据试剂的来历和标本的状况以及检查的具体条件，可规划出各种不同类型的检查方法。
ELISA法是免疫诊断中的一项新技术，现已成功地应用于多种病原微生物所致使的盛行症、ELISA检查试剂盒寄生虫病及非盛行症等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定，依据现已运用的作用，认为ELISA试剂盒法具有活络、特异、简略、敏捷、安稳及易于自动化操作等特色。
有的试剂盒中所设阴性对照为不含蛋白质或蛋白质含量较底的缓冲液，致使反响后发作的本底或许较正常人血清的本底低得多。
ELISA试剂盒在实验条件（包括试剂）较难保证安稳的状况下，这种差异法较为合适。
ELISA试验时，注意事项如下：
1.正式试验时，应别离以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证试验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反响，可采用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
2.在ELISA中，进行各项试验条件的挑选是很重要的，其间包含：
（1）固相载体的挑选：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体，在运用前均可进行挑选：用等量抗原包被，在同一试验条件下进行反响，查询其显色反响是否均一性，据此判明其吸附性能是否出色。
（2）包被抗体（或抗原）的挑选：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它试验条件相一同，查询阳性标本的OD值。挑选OD值大而蛋白量少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1～10μg／ml。
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